間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells，簡(jiǎn)稱MSC）是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的多能成體干細(xì)胞。它們?cè)醋灾信邔樱梢苑只啥喾N細(xì)胞類型，包括軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等。

如何識(shí)別間充質(zhì)干細(xì)胞？

間充質(zhì)干細(xì)胞是具有自我更新能力和來(lái)源于中胚層的多能成體干細(xì)胞。對(duì)于體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞的識(shí)別，通常可以通過以下三條標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證：

一、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

間充質(zhì)干細(xì)胞多數(shù)呈纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)，少量呈梭形或不規(guī)則三角形。可運(yùn)用組織塊貼壁法、酶消化法以及兩種方法的結(jié)合分離出MSC，通過傳代培養(yǎng)后，幾乎所有的MSC都具備貼壁生長(zhǎng)的能力，并且具有較強(qiáng)的貼壁能力。

二、表面標(biāo)志物鑒定

間充質(zhì)干細(xì)胞屬混雜細(xì)胞群，其表面抗原也具有非專一性，可同時(shí)表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和表皮細(xì)胞的表面標(biāo)志，如粘附因子、生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子受體以及整合素家族等。MSC的細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定標(biāo)準(zhǔn)為：

• 陽(yáng)性表達(dá)：CD105、CD73和CD90的陽(yáng)性率應(yīng)大于等于90%。
• 陰性表達(dá)：CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR應(yīng)呈陰性，陽(yáng)性率小于等于5%。

需要注意的是，陽(yáng)性標(biāo)記不具特異性，并非每個(gè)MSC都同時(shí)表達(dá)CD105、CD73和CD90。在鑒定過程中，可采用流式細(xì)胞儀對(duì)MSC的細(xì)胞表型進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定。

三、多向分化潛能鑒定

間充質(zhì)干細(xì)胞具有分化為多種細(xì)胞類型的能力，如軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等。通過特異性染色可以鑒定體外成脂、成骨和成軟骨誘導(dǎo)后的分化能力：

• 成脂誘導(dǎo)分化鑒定：細(xì)胞成脂分化誘導(dǎo)2周左右，在倒置顯微鏡下觀察可見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)油滴，經(jīng)油紅O染色后為紅色。
• 成骨誘導(dǎo)分化鑒定：細(xì)胞成骨分化誘導(dǎo)3周左右時(shí)，在倒置顯微鏡下觀察可見不透明區(qū)域，經(jīng)茜素紅染色后可見密集的紅色沉淀物呈結(jié)節(jié)狀。
• 成軟骨誘導(dǎo)分化鑒定：細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)2周左右，在倒置顯微鏡下觀察可見細(xì)胞經(jīng)阿利新藍(lán)染色為淡藍(lán)色。

綜上所述，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、表面標(biāo)志物鑒定以及多向分化潛能鑒定這三條標(biāo)準(zhǔn)，可以較為準(zhǔn)確地識(shí)別間充質(zhì)干細(xì)胞。同時(shí)，這些鑒定方法也為間充質(zhì)干細(xì)胞的研究和應(yīng)用提供了重要的參考依據(jù)。

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